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Tubos de laboratorio y Anticoagulantes.

1. tubos de
laboratorio y
Anticoagulantes

2. ANTICOAGULANTES
Son sustancias que como su nombre lo dice
previenen la realización del proceso de
coagulación.
Son aditivos elegidos adecuadamente para
asegurar que la cantidad de sangre a estudiar,
cambie lo menos posible antes del proceso
analítico.
Existen diferentes tipos de ellos y debe
seleccionarse siempre el tipo de anticoagulante
apropiado para el estudio que se va a realizar y la
adecuada proporción de anticoagulante-sangre.

3. Cómo elegir el tubo
de recolección de sangre
correcto
Como profesional de laboratorio
clínico, su labor la realiza todos los
días; usando tubos para
recolectar sangre de sus
pacientes para realizar las
pruebas necesarias.
Este proceso se aplica tanto a la
química clínica, hematología,
serología, microbiología, etc. Pero
si usted es un extraccionista recién
graduado, es posible que no esté
100% seguro de qué tubo usar
para qué pruebas.

4. La diferencia entre suero,
plasma y sangre total
Sangre total:
La sangre total es sangre que fluye
libremente a través del cuerpo humano.
Si está fuera del cuerpo y con un
anticoagulante y no está separado en
la porción líquida y las células, todavía
se llama sangre total.
Plasma:
Es la porción líquida de la sangre
cuando el tubo contiene
anticoagulante. El uso de un
anticoagulante conserva el fibrinógeno.
Suero:
Una vez fuera del organismo, la sangre
se coagulará naturalmente y se
separará en líquido y células. Este
líquido se llama suero. Es la porción
líquida de un coágulo de sangre. No
contiene fibrinógeno.

5. Aditivos utilizas
en análisis
clínicos

6. Clasificación de tubos
Los tubos de recolección de sangre se dividen en tres
grupos principales dependientes de lo que desee
lograr con la muestra de sangre.
Tubos de sangre total:
 Tubo EDTA (tapa lila)
 Tubo con citrato para VSG(tapa negra)
Tubos de plasma:
 Tubo con citrato de sodio (tapa celeste)
 Tubo con heparina (tapa verde)
 Tubo con floruro u oxalato (tapa gris)
Tubos de suero:
 Tubo sin aditivos (tapa roja)
 Tubo con activador de coágulo (tapa naranja)
 Tubo con gel separador (tapa amarilla)

7. EDTA: Etilén diamino tetra
acetato
•Se une al calcio iónico impidiendo la
coagulación y la agregación plaquetaria.
•Puede ser sal disódica, dipotásica o
tripotásica
•Su concentración debe ser tal que no
modifique los parámetros de GR,GB,
plaquetas y reticulocitos.
•Es el aditivo estándar usado en hematología
debiendo cumplir los siguientes requisitos:
No alterar el volumen de los eritrocitos
No producir hemolisis.
Evitar la agregación de las plaquetas.
No alterar la morfología de los GR.

8. Hemograma
completo
a) Cantidad de GR: se obtiene por método automatizado
b) Hematocrito: es la relación del volumen de GR con el de la
sangre total expresada en %.
c) Hemoglobina
d) Indice hematimétrico:
*VCM (Volumen Corpuscular Medio)-
(expresa el volumen medio de los GR. VN.: 80 a 100 fL
*HCM (Hemoglobina Corpuscular Media)-
(cantidad de Hb contenida en el GR. (VN: 25 A 33 pg/Gr)
*CHCM (Concentración de Hemoglobina Corpuscular Media)
. (VN: 28 a 36 g/dl)
*RDW (amplitud de distribución de eritrocitos). (VN hombre
11.9 a 15%, Mujeres 11.6 a 15.2%)
e) Recuento de GB
f) Recuento de plaquetas:
g) Recuento de reticulocitos
Tambien se utiliza la sangre del tubo de EDTA para realizar
grupo y Factor por directa

9. Hematocrito:
Los valores de referencia:
Al nacer: 44-62%
Niños de 1 año: 35% +/-5
Niños de 10 años: 37% +/-5
Hombres: 40 –54%
Mujeres: 36-47%
Aumenta en: quemaduras,
infecciones, intoxicaciones,
policitemia, insuficiencia respiratoria
crónica.
Disminuyen en: concentración baja
del volumen globular, anemia
crónicas, cirrosis, insuficiencia
cardiaca.
Se mide con contador hematológico
(citometría hemática electrónica) o
por micro metodo (micro Hto)

10. Técnica para realizar
Micro hematocrito
1. Extraer una muestra de sangre total realizando una
punción con la lanceta en el dedo gordo en la
periferia o directamente del tubo con EDTA.
2. Con un tubo capilar tomar sangre del lado de la
raya roja (con anticoagulante), hasta llenar por más
de la mitad del tubo. Luego taparlo con plastilina.
3. Colocar el tubo capilar en la centrífuga de
hematocrito.
4. Con un lector de hematocrito, determinar el valor.

11. Hemoglobina:
Es una proteína conjugada que transporta el
O2 y el CO2.
contiene hierro y es la que le da el color rojo a
los GR.
Su medida es fundamental para diagnosticar
anemia.
Valores Normales:
Neonatos, sangre de cordón: 13.6 –19,6 g/dl
Niños de 1 año: 11.2 dl
Niños de 10 años: 12.9 g/dl
Hombres: 13.5 –18,0 g/dl
Mujeres: 12.0 –16,5 g/dl
Se mide con método manual o automatizado

12. Recuento de GB: Formula leucocitaria
Es el numero de leucocitos por mm3.
Enumera todos los tipos de células nucleadas de la
sangre.
VALORES NORMALES:de 5.000 a 10.000 /mm3
Cifras mayores a 10.000 indican leucocitosis
cifras menores a 5000 indican una leucopenia
Se mide con método automatizado o manual
realizando un frotis sanguíneo
Valores de referencia de cada tipo celular
Neutrófilos segmentados: 55-70%
Eosinófilos: 1-4%
Basófilos: 0-1%
Linfocitos: 20-40%
Monocitos: 4-8%

13. Técnica para
realizar Frotis
sanguíneo
Para hacer un buen frotis de sangre, se necesita
muy poco equipo, parte de la práctica sobre cómo
crear un buen frotis y un buen microscopio.
El equipo que necesitará incluye:
1) muestra de sangre
2) 2 portaobjetos de vidrio
3) Pipeta
4) Metanol
5) Colorante de Giemsa o May-Grundwald-Giemsa
6) Agua destilada
7) microscopio

14. 3) Llevar el portaobjetos esparcidor
hacia atrás contra la gota de sangre
para que la sangre
se extienda en una línea delgada a
través de la acción capilar.
Procedimiento
1) Colocar 1 gota de
sangre de una muestra
capilar o del tubo de
EDTA sobre uno de los
porta objetos.
2) Colocar el extremo mas corto
del otro porta a 30°sobre el que
tiene la muestra de modo que este
quede debajo de la gota de
sangre
Gota de
sangre
4) Con un movimiento
constante y definido
realizar el extendido sin
levantar el portaobjeto;
este se levanta antes de
llegar al extremo.
De esta manera queda
extendida una capa
homogénea sobre
la superficie del
porta receptor.

15. -El extendido debe ser homogéneo. Esto garantiza que las células se
distribuyan uniformemente y que se pueda hacer un buen análisis
de las células sanguíneas, en cuanto a forma y número.
-Los laterales del frotis deben ser lisos de principio a fin.
-El frotis debe respetar un margen de 1 a 2 mm a los laterales del
portaobjetos.
-La capa de extendido debe ir disminuyendo su grosor
paulatinamente desde el inicio hacia el final.

19. Coloración
Cada portaobjeto debe estar identificado
para evitar errores.
1) Fijación de la Muestra: Para fijar la muestra,
se agregan unas gotas de metanol sobre el
extendido para luego dejar secar.
2) Lavar con agua de la canilla durante 1´y
dejar secar.
3) Tinción: Cubrir completamente el
portaobjeto con el colorante gota a gota, o
bien, puede emplear la cubeta de tinción.
En caso de emplear la cubeta de tinción,
agregar el colorante dentro del cestillo de la
misma, disponer los portaobjetos en el asa y
sumerjirlos.
4) Dejar actuar el colorante por 5´aprox.
5) Lavar con agua destilada y dejar secar.
6) Leer en el microscopio en guarda griega.
Los resultados observados se expresan en %.

20. Citrato de
Sodio
Forma complejos con el Calcio.
Puede ser sal sódica
La concentración recomendada es
del 3,2%
Se utiliza para las pruebas de
coagulación (evita el deterioro rápido
de los factores V y VIII) y para la
eritrosedimentación.
Para la eritrosedimentación se utiliza 1
parte de citrato y 4 partes de sangre (0,5
ml : 2ml). Tubo de tapa negra.
Para las pruebas de coagulación se
utiliza 1 parte de citrato y 9 de sangre
(0,25ml : 2,5 ml . Tubo de tapa celeste.

21. Citrato de sodio para VSG
(se utiliza sangre entera)
Es la velocidad de sedimentación de elementos formes
componentes de la sangre en el transcurso de 1 hora.
Se utiliza el método Westergreen : se usa sangre entera
sin diluir DEL TUBO DE TAPA NEGRA y una columna de
30cm de longitud y 2,55 de diámetro interno.
Pasos: 1)Extraer sangre venosa (aprox. 1-2 ml) y homogeneizar con el
anticoagulante (citrato sódico 3.8 % en proporción 1/4). Se recomienda realizar
la determinación dentro de las 2 horas posteriores a la extracción de la muestra.
2) Cargar una pipeta de Westergreen y, en el momento de llegar a la marca 0,
poner en marcha el cronómetro. Esta pipeta está calibrada en mm de 0 a 200.
Asegurarse de que la pipeta esté en una posición de 90 º respecto la superficie,
exenta de vibraciones o de cualquier factor que modifique la VSG.
3)Transcurridos 60 minutos exactos, leer la sedimentación eritrocitaria, que se
expresa en mm/hora, y comparar los resultados obtenidos con los resultados
normales

22. Citrato de sodio para
pruebas de coagulación
Utilizaremos en la sección hemostasia el plasma
sanguíneo, ya que en este se encuentran los factores de
coagulación; el tubo correcto para la recolección de la
muestra es el de tapa CELESTE.
En algunos casos la tapa puede ser color ROSA.
En hemostasia se pueden realizar varias pruebas
referidas a la coagulación: por ejemplo
•Pruebas para evaluar la función plaquetaria:
-Tiempo de sangría: Mide la fragilidad y la
permeabilidad vascular y función plaquetaria. (DUKE)
-Prueba de lazo
-Retracción del coágulo
•Pruebas para evaluar la coagulación:
-Tiempo de PROTROMBINA
-Tiempo de TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA
(KPTT)
-Tiempo de TROMBINA
-Tiempo de COAGULACIÓN
•En este caso el objeto de
estudio es el plasma
sanguíneo

23. Tiempo de
Protrombina o Quick
Se define como el tiempo en segundos necesaria para la formación del
coagulo después de la adición de calcio y tromboplastina al plasma.
Depende de la concentración plasmática del fibrinógeno y los factores II, V,
VII y X.
Mide la integridad de la vía extrínseca de la coagulación.
Se junta el plasma del paciente con el factor III tisular. Se cuenta el tiempo
que demora la formación del coagulo.
Este test es muy sensible a la disminución de los factores VIII y X (K
dependientes). Da una medida indirecta de la función hepática: si el tiempo
de la prueba se extiende, puede que este órgano no funcione bien.
Valores Normales: 10-13 segundos en formarse el coagulo, o registrarse en %
(70 a 100%)

24. KPTT/PTT/APTT Tiempo de
trombina
Evalúa el estado del mecanismo intrínseco
de la coagulación.
Se define como el tiempo en segundos
necesario para la formación del coagulo
después de la adición de calcio y
fosfolípidos al plasma citratado pobre en
plaquetas
se introduce plasma del paciente a 37°
con un reactivo que active al factor XII.
Valores Normales: formación de coagulo a
los 35-45 segundos si el mecanismo
intrínseco está intacto.
-Este tiempo se ve prolongado en
pacientes con deficiencia del factor VIII o
que reciben heparina.
Se junta el plasma de paciente con
trombina del laboratorio.
Mide el tiempo en que tarda en
formarse la fibrina.
Valor normal: 18 segundos si el
paciente tiene normal
concentración de fibrinógeno

26. Heparina
Es un polisacárido presente en los tejidos
en concentraciones menores para
impedir la coagulación de la sangre.
Inhibe el pasaje de PROTROMBINA a
TROMBINA necesaria para formar la
FIBRINA
Puede ser sal sódica, potásica, amónica
o de litio.
Es el aditivo menos interfiriente en las
pruebas. No es bueno para el recuento
de leucocitos ni plaquetas porque
provoca agregación celular, salvo que
en vez de heparina de litio se utilice
heparina SÓDICA.
El color de la tapa del tubo puede ser
verde o azul.
Se utiliza tanto en estudios de rutina
como en estudios especializados.
Se utiliza para Química CLÍNICA
para estudios como: glucosa, urea,
creatinina, acido úrico
-Hepatograma: TGO/TGP/FAL,
bilirrubinas, proteínas totales.
-Ionograma.
-Perfil cardíaco: LDH,CPK,CPK-
MB;TROPONINA.
-Perfil lipídico: Colesterol total, LDL,
HDL, Triglicéridos.
-Perfil pancreático: amilasa, lipasa.
En este caso el objeto de estudio es el plasma
sanguíneo

27. Fluoruro u Oxalato
•Son los anticoagulantes menos comunes y los menos
utilizados.
•Pueden ser sales sódicas o potásicas.
•Se utiliza para determinaciones de glucosa plasmática.
•El color de la tapa de este tubo es gris.
En este caso el objeto de estudio es el plasma
sanguíneo

28. Tubos sin aditivos o
con gel separador
Se utilizan en serología e inmunología.
Los métodos que se emplean en esta
sección sirven para diagnosticar
enfermedades infecciosas; por lo que
el objeto de estudio es el suero
sanguíneo: en el estudio de agentes
infecciosos se busca obtener una
reacción “antígeno-anticuerpo”.
Pueden tener tapa roja, blanca o
amarilla (con gel separador).
En este caso el objeto de estudio es el SUERO
sanguíneo

29. Los métodos que se utilizan son:
a) pruebas de aglutinación (metodo manual).
b) Inmunodifusión radial (metodo automatizado).
c) ELISA (metodo manual, semiautomatizado y automatizado).
d) Inmunofluorescencia (IFI) (metodo manual).
e) inmunoturbidimetria y nefelometría (método automatizado).
f) Quimioluminiscencia (QLA) (método automatizado).
g) Electro quimioluminiscencia (ECLIA) (método automatizado).
Se llama ANTIGENO (Ag) a toda
sustancia o agente externo agresivo
que entra en el organismo y genera
en él una reacción. Ej.: virus,
bacterias, parásitos, etc.
Se llama ANTICUERPO (Ac) a los
productos elaborados por el
organismo como respuesta a la
invasión producida por un agente
externo o AG.

30. Determinaciones más frecuentes
VDRL para sífilis.
HAI para toxo y chagas.
FLUORESCENCIA para toxo, chagas virus
Epstein Barr, autoanticuerpos
Ag febriles para Brucella y Salmonella
Herpes IgG/IgM
Hepatitis A, B, C
HIV
CMV
Rubeola
Inmunoglobulinas totales

31. Cabe destacar que cada vez que colocamos la muestra
en un tubo con aditivo, este debe ser homogeneizado, es
decir, lograr que el anticoagulante se mezcle de manera
uniforme con la sustancia de posee cada tubo en su
interior.
Antes de pasar a la etapa analítica de la muestra, ésta,
según el estudio a determinar, sebe ser centrifugada por
metodo mecánico (centrífuga) para que los componentes
sanguíneos queden perfectamente separados y así poder
trabajar con la porción de sangre adecuada.

32. Criterios para el rechazo de las muestras de
sangre:
a) Muestra de sangre totalmente
coagulada en el tubo de ensayo
b) Muestra recolectada con
anticoagulante inadecuado
c) Error en la identificación de la muestra
d) Suero o plasma hemolizado
e) Suero o plasma ictérico
f) Suero o plasma lipémico
g) Volumen de sangre insuficiente para
el tubo con anticoagulante
h) El volumen de sangre no es suficiente
para realizar las pruebas