WESTERN_BLOTTING[1] LABORATORIO. PPTX----

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1. Western blottting El  Western blot , es una técnica analítica usada para detectar proteínas  específicas en una muestra determinada (una mezcla compleja de proteínas, como un extracto tisular). Conocida como " Gold Standard"

2. Western blottting Se denomina así por su similitud con: Northern blotting mRNA Southern blotting fragmentos de DNA

3. Pasos para western blotting Añadir la mezcla de proteína tratada con SSD al foso de gel Separar por electroforesis Transferencia Bloqueo Detección Análisis

4. Pasos para western blotting

5. western blotting -VIH

6. ANALISIS Colorimétrica : sustrato reacciona gracias a la enzima  reporter  ( peroxidasa ) unida al anticuerpo secundario. La cuantificación proteica se evalúa por  densitometría O espectrometria . Quimioluminiscente : incubación de la membrana con un sustrato, que emitirá luminiscencia al ser expuesto al  reporter  que trae unido el anticuerpo secundario. La luz emitida es captada por una película fotográfica o, más recientemente, por cámaras CCD

7. ANALISIS Radiactiva : No requieren sustratos enzimáticos; en su lugar se coloca una película fotográfica contra el Western Blot y la actividad radiactiva del marcador provoca la aparición en ella de regiones oscuras. Fluorescente: Se procede a la excitación lumínica de éstos que les provoca una excitación. Ésta es detectable por un fotosensor, como una cámara CCD equipado con los filtros de emisión apropiados. La fluorescencia es considerada uno de los métodos de análisis más sensibles.

8. APLICACIONES MEDICAS Diagnostico de VIH Se emplea como prueba definitiva de la  encefalopatia espongiforme bovina comúnmente llamada "enfermedad de las vacas locas". Algunas clases de la prueba para la enfermedad de lyme  usan el Western blot . En veterinaria, ocasionalmente se emplea el Western blot para confirmar la presencia del FIV en gatos.

9. Ventajas del uso de prueba de Western Blot Es una prueba más específica que la ELISA.  Puede detectar una proteína en una mezcla de cualquier número de proteínas Da información sobre el tamaño de la proteína. 

10. Desventajas del uso de prueba de Western Blot Si una proteína se degrada rápidamente, Western Blot no lo detectará bien. Esta prueba toma más tiempo que otras pruebas existentes. También podría ser más costoso