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amebas de vida libre

1. Amebas de vida libreAmebas de vida libre
Introducción
Epidemiología
Biología
Patología
Formas clínicas
Diagnóstico
Estudios en León, Nicaragua
Byron Leiva T. MSc., PhDByron Leiva T. MSc., PhD
Departamento de Microbiología y ParasitologíaDepartamento de Microbiología y Parasitología
Facultad de Ciencias MédicaFacultad de Ciencias Médica
UNAN-LeónUNAN-León

2. IntroducciónIntroducción
Amebas de Vida Libre (AVL) representan un grupo de
amebas, que se encuentran distribuidas ampliamente en
la naturaleza, entre las cuales se encuentran las especies
de Naegleria, Acanthamoeba y Balamuthia.
AVL son protozoos inofensivos en la naturaleza.
En 1965 Malcom Fowler y Rodney F. Carter reportaron
los primeros cuatro casos en humanos.
Naegleria fowleri es un amoebaflagelado el cual produce
meningo- encefalitis amebiana primaria (MAP).
Varias especies de Acanthamoeba son patógenos
“oportunistas” estas AVL son causantes de Encefalistis
granulomatosa amebiana, infecciones en la piel,
neumonía y queratitis.

3. EpidemiologíaEpidemiología
Esta infección ha sido descrita en forma creciente
en el mundo, principalmente en EUA (en estados
del sur, como Florida y Texas), Reino Unido,
Australia, Nueva Zelanda y Checoeslovaquia.
En Latinoamérica han sido reportados casos en
Venezuela, Brasil, Argentina, México y Perú
considerándose estas dos últimas naciones como
áreas endémicas.
En el año 2000 se reportó la descripción de 30
casos diagnosticados en Perú desde 1985.
10,000 casos de queratitis amibiana, a nivel
mundial, 80% asociado a empleo inadeacuado de
lentes contacto.

4. La meningoencefalits amibianaLa meningoencefalits amibiana
Causada principalmente por las siguientes especies de
amebas de vida libre:
Género: Naegleria
N. fowleri
Género:Acanthamoeba
A. culbesrtoniA. castellani
A. polyfaga A. astronixis
A. rhysopodes
Genero:Balamuthia B. madrillaris
Genero:Hartmannella H. vermiformes

5. Diferencias morfológicas de las amebas de Diferencias morfológicas de las amebas de
vida libre causantes de meinigoencefalitisvida libre causantes de meinigoencefalitis
Naegleria Acathamoeba
Trofozoito
Tamaño 15 – 25 µm 15 – 50 µm
Flagelos presentes Ausentes
Pseudópodos romos Espinosos
Quiste
Tamaño 7 – 15 µm 10 – 25 µm
Pared delgada doble

6. Naegleria, Acanthamoeba, Hartmanella 6
Naegleria fowleriNaegleria fowleri
MorfologíaMorfología

7. Acanthamoe
a
Negleria
Amebas de vida libre trofozoitos

8. Balamuthia mandrillaris
Los trofozoitos miden de 15 a 60 m.
μ
Los quistes miden de 15 a 30 m de diámetro
μ
y tienen una triple pared

9. Vías de penetración de las amebas de vida Vías de penetración de las amebas de vida
libre causantes de meningoencefalitislibre causantes de meningoencefalitis
Naegleria:
Puerta de entrada : mucosa nasal
Invasión del bulbo olfatorio a través de la placa
cribiforme
Acanthamoeba:
Puerta de entrada no determinado. Puede ser.
Tracto respiratorio superior, piel, conjuntiva
ocular.
Diseminación hematógena al cerebro

10. Ciclo de vidaCiclo de vida

12. HÁBITAT DE AMEBAS DE VIDA LIBRE

13. PatologíaPatología
Acanthamoeba
N. fowleri

14. Naegleria fowleriNaegleria fowleri. .
Naegleria spp. es un género de protistas
de la familia Vahlkampfiidae, en la clase
Heterolobosea.
Actualmente se reconocen 8 tipos de N.
fowleri, que se distinguen mediante
pruebas de secuenciación de DNA

15. Factores patogénicos de Factores patogénicos de N. fowleriN. fowleri
N. fowleri penetra vía nasal placa cribiforme
→ →
neuroepitelio olfatorio espacio subaracnoideo
→ →
parénquima cerebral.
- Tamaño del inóculo y virulencia de la cepa.
- Mecanismos de contacto.
- Fagocitosis. Altamente fagocítica. Utiliza amebostomas.
- Proteína CD59-like en su superficie. Inhibe formación poro
MAC (Complejo de ataque a la membrana).
- Fosfolipasa, y actividad de neuraminidasa o elastasa –
desmielinización, lisis celular.
- Proteína formadora de poros – lisis celular.
- Proteína citopática – apoptosis.
- Actualmente se cuenta con el genoma mitocondrial
completo de N. fowleri, y un segmento de 60 kb del genoma
nuclear. Es importante para la patología y el diagnóstico

16. Patología de la meningo encefalitis amibiana Patología de la meningo encefalitis amibiana
primariaprimaria
Naegleria:
Meningitis purulenta y ecefalitis
hemorrágica necrótica
Lesiones en área olfatoria, cerebro
anterior y cerebelo.

17. Cuadro clinicoCuadro clinico
Los signos y síntomas inician en promedio 1 -7 días después de la
exposición, el curso de la enfermedad es fulminante, con una
mortalidad del 95%, habitualmente dentro de los 10 - 15 días
posteriores a la aparición de manifestaciones clínicas:
Cefalea bifrontal, bitemporal
Fiebre elevada
Náusea, vómito
Cambios en la conducta (irritabilidad, conductas aberrantes)
Datos de irritación meníngea
Confusión
Convulsiones
Parálisis pares craneales (III, IV, VI) x edema cerebral
Progreso rápido hacia el coma
Muerte: hipertensión intracraneal herniación cerebral paro
⇒ ⇒
cardiopulmonar

18. El género El género AcanthamoebaAcanthamoeba
Grupo con alrededor de 24 especies, ha
sido reclasificado en 15 diferentes genotipos.
La especie predominante en gran parte de
los casos corresponde al genotipo T4, y se
sugirió que fuera denominado complejo A.
castellanii (Booton G, Visvesvara G, et al.
2005.)
La infección es de presentación insidiosa
(semanas, meses). Vías de entrada de los
trofozoítos: piel, aparato respiratorio
bajo, nasal.

19. La infección del SNC asociada a La infección del SNC asociada a
AcanthamoebaAcanthamoeba
La mayor parte de los casos a personas
inmunocomprometidas, con HIV+/SIDA
Quimioterapia
Enfermedades crónicas, debilitantes,
diabetes, lupus sistémico, cáncer,
desnutrición y alcoholismo, TB, otras.
También influye el empleo excesivo de
esteroides y antibióticos.

20. Factores patogénicosFactores patogénicos
Las células inmunes presentes en cerebro sugieren un
desequilibrio en los niveles de citocinas, con
sobreproducción de citocinas proinflamatorias.
- Adhesión a células de la barrera hematoencenfálica
(endotelio capilar, plexos coroides, membrana de la
coroides) mediante la proteína de unión de la manosa (BMP)
expresada en el trofozoíto.
- Las serin-proteasas de Acanthamoeba alteran la integridad
de la barrera hematoencefálica: degradan las uniones
estrechas, incluyendo la zonal ocluddens1 y la ocludina.
- Inducción de apoptosis
- Fagocitosis mediante las llamadas copas de alimentación o
amebostomas.
- Se ha caracterizado una proteína formadora de poros,
acantoporina.

21. Características clínicas de la Características clínicas de la
meningoenceflitis por meningoenceflitis por AcanthamoebaAcanthamoeba
En pacientes inmunodeprimidos o con
enfermedad debilitante.
Comienzo insidioso
Alteraciones mentales, alucinaciones,
convulsiones, cefalea, fiebre, signos de
meningismo.
LCR purulento y con examen
bacteriológico negativo

22. Síndromes causados por Síndromes causados por AcanthamoebaAcanthamoeba
Meningoencefalitis necrosante
granulomatosa focal subaguda y crónica
Lesiones dermatológicas semejantes a
micosis profundas
Ulceración corneal y uveitis
Diseminación granulomatosa a diversos
tejidos

23. Acanthamoeba y Balamuthia pueden
albergar Legionella pneumophila, Coxiella
burnetii, Pseudomonas aeruginosa, Vibrio
cholerae, Helicobacter pylori, Listeria
monocytogenes y Mycobacterium avium,
mimivirus: Potencial como reservorios

24. Queratitis amibianaQueratitis amibiana
Hallazgos recientes implican al genotipo T4 -
principalmente A. castellanii en ~ 94% de los
casos como agente etiológico de la queratitis
de origen amibiano (Booton, Visvesvara et al,
2005; Booton et al. 2009).
La enfermedad se asocia en el 80% de los
casos a uso de lentes de contacto (limpieza
y/o almacenamiento inadecuados) por
sujetos sanos e inmunocomprometidos, a su
empleo durante deportes acuáticos y a
traumatismos corneales.

25. DiagnósticoDiagnóstico
Es fundamental, y se basa en el hallazgo de los infiltrados
tempranos, antecedentes, signos y síntomas, aún antes de
que aparezcan úlceras.
Se emplean:
• Raspado de epitelio, para su observación en fresco y con
diferentes tinciones: Giemsa, Tricrómica, PAS, Calcofluor
white, este último permite observar infiltrado inflamatorio,
quistes y trofozoítos.
• En lesiones avanzadas, es necesario recurrir a la biopsia
corneal.
• Cultivo.
• Microscopía confocal para el estudio del epitelio (costosa, y
en sitios donde existe el equipo).
• IFI, ELISA.
• Técnicas recientes incluyen, con excelentes resultados,
PCR.

26. Diagnóstico de la meningoencefalitis Diagnóstico de la meningoencefalitis
amibiana primariaamibiana primaria
Imagenología: RMN y TAC se emplean
para visualizar la localización y extensión de
las lesiones ("masa ocupativa", edema,
hidrocefalia, otras)
Examen del LCR: Tinciones
◦No debe refrigerarse
◦No debe centrifugarse
Cultivo en placa de agar no nutritivo, con
suspensión de E. coli.
Inoculación intranasal de ratones
Inmunodiagnóstico: IFI, detección de anticuerpos
circulantes.
Molecular: FISH, PCR.

27. Estudio en Nicaragua, a partir de diferentes Estudio en Nicaragua, a partir de diferentes
fuentes de aguafuentes de agua
Byron Leiva, Emma Clasdotter, Ewert Linder and Jadwiga Winiecka-Krusnell
Free-living Acanthamoeba and Naegleria spp. Amebae in water sources of
León, Nicaragua. Rev. Biol. Trop. Vol. 56 (2): 439-446, June 2008.

28. Diferentes fuentes de aguaDiferentes fuentes de agua
Lugares:
León: área urbana y rural, San Jacinto.
Chinandega: Posoltega.
Managua:Tipitapa, trapiche,
trapichito.
Boaco: Aguas claras.
Muestra:
A partir de:
Agua de tubo
Corrientes
Pozo
Contenedores de agua.
Tubo cónico 50 ml de agua.

29. Métodos de Identificación:Métodos de Identificación:
10 µm
Muestras de agua
Filtrada
Cultivo en agar- agar
con bacteria (E. coli)
Microscopía Test
Fisiológicos
Test
Immunohistoquímicos
Morfología/
tamaño
Exflagelación/
Termotolerancia
IF
Tincion de Cellulose
Test
Molecular
FISH

30. Identification of Acanthamoeba
Identificación of Naegleria
cellulose staining FISH
FISH IF
Métodos de identificación Immunohistoquímicos y Métodos de identificación Immunohistoquímicos y
molecularesmoleculares
Anticuerpos
Monoclonales y
Policlonales anti-Naegleria
Fluorescence in situ
hybridization (FISH),
Sondas específicas
de genes, 18S
rRNA.

31. ResultadosResultados
Detección de amebas de vida libre en muestras de aguas de León y Detección de amebas de vida libre en muestras de aguas de León y
areas geotermales.areas geotermales.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
%
40°C42°C>45°C40°C42°C>45°C
Acanthamoeba
Naegleria
León Area Geotérmicas
Temperature

32. ConclusionesConclusiones
Nuestro estudio encontramos que Amebas de vida libre están
distribuidas ampliamente en diferentes fuentes de agua en Nicaragua.
Acantamoeba y amebas termotolerantes potencialmente patógenas
han sido encontradas con alta prevalencia en las dos áreas estudiadas.
24 de 39 (61.5%) de amoebaflagellados podrían ser identificadas
como Naegleria spp., 50% de ellas fueron asignadas como N.
lovanensis. La prevalencia de N. lovanensis fue más alto en aguas de las
áreas geotérmicas (56.3%) que en la área del municipio de León
(37.5%).
La presencia de amebas termotolerantes como Negleria en diferentes
fuentes de aguas, especialmente N. lovanensis es un indicador de la
presencia de N. fowleri, esto sugiere la posible existencia de amebas
patógenas en estos mismos lugares.

33. OTROS ESTUDIOSOTROS ESTUDIOS

34. Determinar la frecuencia de Amebas de vida libre en Determinar la frecuencia de Amebas de vida libre en
las aguas de los diferentes ambientes del hospital las aguas de los diferentes ambientes del hospital
España de Chinandega.España de Chinandega.
 
Objetivos Específicos
Describir los diferentes ambientes del hospital con fuentes de agua.
Aislar e identificar los tipos de amebas de vida libre presente en las
muestras de aguas estudiadas.
Relacionar las especies de amebas de vida libre aisladas con fuentes de
aguas de los diferentes ambientes del hospital.

35. RESULTADOSRESULTADOS
TABLA 1.Descripción del área con las diferentes fuentes de aguaTABLA 1.Descripción del área con las diferentes fuentes de agua
AMBIENTE
FUENTES DE AGUA

BAÑO LAVAMANOS PILA TOTAL
n n n n
CIRUGIA 2 3 0 5

COCINA
0 1 4 5
CONSULTA EXTERNA
0 5 0 5

DIALISIS
2 2 1 5
EMERGENCIA 3 2 0 5

LABORATORIO
0 5 0 5

MEDICINA
2 3 0 5

ORTOPEDIA
3 1 1 5

PATOLOGIA

0
5 0 5

UCI 1 3 1 5
TOTAL DE FUENTES AGUA 13 (26%) 30 (60%) 7 (14%) 50 (100%)

36. Tabla 2. Aislamiento e identificación de Amebas de vida libre Tabla 2. Aislamiento e identificación de Amebas de vida libre
presente en las muestras de aguas estudiadas presente en las muestras de aguas estudiadas
Especie Cultivo Frotis Ex flagelaciónIFI Total
(+) (+) (+) **AbMo***AbPoli
Acanthamoeba
spp
10(20%) 10 *Neg No aplica 10 (20%)
Naegleria spp 2(4%) 2 2 *Neg 2 2 (4%)
AVL no
identificadas
9 9 *Neg No aplica 9
Total 21(42%) 21 2 2 21
* Neg: Negativo **AbMo: Anticuerpos monoclonales * * * AbPoli: Anticuerpos policlonales

37. ConclusionesConclusiones
1. De 50 muestras examinadas, se encontró la presencia de 21 (42%) AVL.

2. De las fuentes de aguas del hospital, donde más se encontró AVL fue en
lavamanos.

3. Se logró aislar un mayor porcentaje de amebas del género Acanthamoeba
10 (20%) y Naegleria 2 (4%).

4. De manera general se encontró AVL en lavamanos con 11 y en menor
cantidad amebas fue en Pilas con 3.
 
5. De la presencia de Naegleria spp, fue identificada utilizando anticuerpos
monoclonales y policlonales por IFI.
6. En los ambientes donde más predominaron las AVL fue en las salas de cirugía
4 (19%), medicina 3 ( 14%) y emergencia 3 (14%).

38. “Identificación de amebas de vida libre en aguas de uso doméstico, en la
comarca Chacraseca del Departamento de León”

39. UBICACIÓN GEOGRÁFICA DEL
ÁREA DE ESTUDIO
Municipio de León
Comunidad de Chacraseca

40. COMUNIDAD DE CHACRASECA

41. SELECCIÓN DE MUESTRAS

42. Tabla Nº 4: Distribución de Amebas de Vida Libre según fuentes de agua
*Amebas de Vida Libre no identificadas
AVL
Encontradas
Fuentes de Agua
Pozos Pilas
Agua
de
Lluvia
Total
Naegleria spp 13 0 0 13
Acanthamoeba spp 2 1 0 3
Otros* 1 5 4 10
Negativa 10 0 0 10
Total 26 (72)6 (17)4 (11)36

43. Agradecimientos:Agradecimientos:
Estidiantes de Bioanálisis, Medicina y Biología, UNAN-Leon
Emma Claesdotter, Estudiante de Suecia.
Personal del Dpto. De Microbiology, UNAN-Leon:
Brenda Mora
Oscar Arbizú
Jairitzinnia Palacios
William Morales (Fotos)
Sida/SAREC
Cerro Negro. 1999.

44. ANEXOSANEXOS