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analisis paper stapper 2016

1. Fig. 1. Schematic representation of dorsoventral phenotypes . Fate maps of wild-type (A), Tc -Toll knockdown (B ), Tc-sog knockdown (C), Tc-dpp knockdown (D) and Tc -twist knockdown (E) Tribolium embryos at the beginning of gastrulation (Fonseca et al., 2009). Fonseca 2009

2. Tc -twist knockdown results in loss of mesoderm

3. Análisis de transcriptoma ( T c-twist , T c- toll , T c- sog , T c- dpp knockdown ) En total se encontró cambios de expresión en 796 genes. 347 en Tc-twist, 310 en Tc- Toll , 18 en Tc- sog y 377 en Tc- dpp . Se centraron en 222 genes, en los cuales su expresión varió en más de una condición knockdown

4. “ As expected, the genes regulated by dorsalizing and ventralizing genes were predominantly regulated in opposite directions (e.g. dpp and Toll ) .” “ Genes co-regulated by two ventralizing genes were mostly regulated in the same direction ( e.g . Toll and twist) ”

5. Nuevos genes encontrados que participan en desarrollo de neuroectodermo y serosa

6. Análisis funcional de genes neuroectodermales ( tc-uif , tc-tartan ) Fig. 5. Tc-uninflatable and Tc -tartan are required for embryogenesis . (A-C,F-K) Whole-mount ISH. (A′-C′,F′-K′) DAPI staining of the respective embryos . Ventral surface views, except for F, which shows a lateral view. Anterior points to the left. (A-C) Expression of Tc-uninflatable ( Tc-uif ) in wild-type embryos . (A,B) Tc-uif is expressed in the ectoderm with increased levels towards the mesodermal border at primitive pit stage (A) and early gastrulation (B ). (C) Tc-uif expression is maintained in the ectoderm during germ band extension . (D,E) Tc-uif knockdown. DAPI staining of embryos during germ band extension (∼24-48 h after egg laying). The abdominal segments of Tc-uif knockdown embryos are thinner and often bent.

7. Identificación de genes que son regulados por tc-toll y tc - twist Receptor FGF Componentes vía Notch Downstream FGF

8. Identificación de genes que son regulados por tc-toll y tc - twist Fig. 6. Expression of genes differentially regulated upon knockdown of Tc -Toll and Tc -twist. (A-N) Whole-mount ISH of embryos at blastoderm stage (A-C ), primitive pit stage (E-H,J,L,M,N) or early gastrulation stage (D,I,K). (A′-N′) DAPI staining of the respective embryos. The anterior pole points to the left .( A-H,M) Ventral surface views. (I-L,N) Lateral views with dorsal side pointing upwards. All genes (except in G,H and M) are expressed in the presumptive mesoderm . Note that Tc -cactus (B) is also expressed in ventral parts of the serosa. Tc -E( spl )1 (G) and Tc -E( spl )3 (H) are expressed in narrow lateral stripes at the border of the mesoderm.

9. Functional analysis of mesodermally expressed genes 28 % survival Tc- zfh1 kd This suggests that Tc-zfh1 is required to maintain Tc -twist expression subsequent to the activation of Tc-zfh1 by Tc-twist.

10. Discusiones El alto numero de genes con expresión diferencial a lo largo del eje AP refleja el hecho de que el tamaño de la serosa y estructuras de la cabeza son afectadas por genes de patterning DV como Tc- toll , Tc- sog y Tc- dpp . En Tc-twist rnai , con la excepción de la formación del surco ventral, todos los movimientos morfogenéticos en estadios temprano (plegamiento del amnios, extensión de la banda germinal ) y la mayoría de los tardíos (retracción de la banda germinal, apertura de la cavidad amniótica y cierre dorsal) no se ven evidentemente afectados . Tc- uif es necesario para el desarrollo embrionario, ya que knockdown de este gen afecta el patterning o la morfología de la ZAS. Tc- tartan tiene un rol esencial durante el desarrollo temprano del SNC. La amplia expresión (ventral) del ligando Delta y los dos homólogos en tribolium , E( spl ) sugiere que la vía de señalización Notch está activa en el mesodermo presuntivo. De los nuevos genes encontrados que son regulados por Tc- toll y Tc-twist, solo Tc-zfh1, codifica un factor de transcripción. Tc-zfh1 es requerido para la mantención de expresión de Tc-twist y por lo tanto es un componente esencial para el desarrollo mesodermal en tribolium .